Вирусологические исследования > Знания
Знания    

Вирусологические исследования

Вирусологические исследования

Реакция коагглютинации (РКОА) основана на способности белка А золотистого стафилококка (штамм Cowan 1) соединяться с Fc-фрагментами lg человека. При этом Fab-фрагменты остаются свободными для реакции с гомологичными антигенами.

Основываясь на этом принципе, Мазанкова Л. Н. и Косоротико-ва А. И. внедрили в пpaктику тест твердофазной коагглютинации для индикации ротавирусного антигена в фекалиях больных. В качестве диагностикума использовали микробные клетки стафилококка, обработанные гипериммунной сывороткой против ротавируса обезьян (SA 11). Титр антигена определяли по наибольшему разведению, вызывающему коагглютинацию бактерий, покрытых антителами (на ++) на твердой фазе лунок панелей из полистирола.

Авторы установили специфичность теста при обследовании 410 детей в возрасте от 1 месяца до 14 лет, из которых у 84 (21%) идентифицирована ротавирусная инфекция (Мазанкова Л. Н., Косоротикова А. И., 1989).

Применение РКОА параллельно с ИФА и РАЛ показало близкую корреляцию результатов использованных методов (Zhang Y. et al., 1989 Pereira V. et al., 1992 Jap K. et al., 1992). Однако имеются сведения о появлении неспецифических реакций с копроматериалами, которые можно устранить предварительной адсорбцией взвесью стафилококков.

В то же время, несмотря на совпадение результатов обследования материалов РКОА и ИФА, чувствительность ее и специфичность оказалась ниже, чем у ИФА и сравнима с латекс-агглютинацией (Jap К. et al., 1992).

Таким образом, результаты применения РКОА позволяют рекомендовать ее для диагностики ротавирусной инфекции в лабораториях, где отсутствует возможность использования более чувствительных и специфичных методов. Однако апробированная в последнее время модификация РКОА и радиоиммунопреципитации с использованием белка А золотистого стафилококка позволила значительно повысить чувствительность и специфичность метода и изучить иммунологический ответ к VP2, VP6 и NSP2 в сыворотках и копроматериалах детей с RV инфекцией (Colomina I. et al., 1998).

Реакция агглютинации латекса (РАЛ) применяется в лабораторной пpaктике в связи с усилившейся в последние годы тенденцией использовать в качестве носителей антигенов и антител инертных синтетических материалов. С этой целью используют полистирольные латексы — синтетические глобулы со стандартным размером частиц около 0,8 мкм.

Более мелкие по размеру частицы (0,2-0,3 мкм) оседают в реакциях медленно и требуют ультрацентрифугации в процессе приготовления диагно-стикума, крупные же ( 1 мкм) часто дают неспецифические реакции. Частицы латекса, предварительно адсорбированные антителами (антигенами), приобретают способность агглютинироваться в присутствии гомологического антигена (антитела) и визуализируют специфический комплекс антиген-антитело.

С целью повышения специфичности и чувствительности метода латексные частицы могут быть сенсибилизированы иммуноглобулинами (Amer A. et al., 1990). В связи с простотой и скоростью проведения исследования, а также низкой стоимостью латекс-агглютинация используется в лабораторной пpaктике достаточно широко: Ruggeri F. et al., 1992.

В настоящее время налажен выпуск коммерческих тест-систем для латекс-агглютинации, что послужило основанием для проведения работ по сравнительной оценке их диагностической эффективности.

Обобщенные результаты оценки РЛА и других лабораторных методов обнаружили, что показатели чувствительности и специфичности РЛА по сравнению с ПЭМ, ИФА, ЭФ в ПААГ были достаточно высоки и равнялись 70-96% и 80-100% соот-ветствено (Santos N. et al., 1989 Molyneaux P. J. et al., 1989 Amer A. et al., 1990 Hendricks M. K. et al., 1995). Применение моноклональных антител еще более повышало диагностическую ценность РЛА (Dennehy Р. et al., 1988 Zbinden R. et al., 1992 Sanchez R. et al., 1993).

Наряду с коммерческими латекс-системами исследователи применяют и лабораторные тесты, которые дают сопоставимые с ними результаты (Amer A. et al., 1990).

В то же время ряд авторов указывали на то, что применение РЛА не лишено недостатков, так как дает определенное число ложных результатов. Так, при обследовании 200 больных детей методами ИФА и РЛА выявлено 11 ложнонегативных проб при показателях чувствительности и специфичности равных 86 и 95% соответственно (Amer A. et al., 1990).

Позднее другие авторы при обследовании 585 проб стула больных детей методом РЛА и ЭФ в ПААГ получили показатели чувствительности и специфичности равные 96 и 100% соответственно. При этом обнаружено 6 ложноотрицательных и 3 ложноположительных результата в отличие от ЭФ в nAAT.(Zbinden R. et al. 1992).

По данным Hendricks М. К. et al. обследование 103 детей в возрасте от 1 месяца до 5 лет методами ПЭМ, ЭФ в ПААГ и РЛА показало, что чувствительность этих методов равнялась 84, 90 и 80%, а специфичность 100, 100 и 81% соответственно. Авторы обнаружили 15% ложноположительных результатов по данным РЛА (Hendricks М. К. et al., 1995), что может быть связано при рота-вирусном гастроэнтерите с наличием крови в исследуемом материале.

В связи с этим при получении положительных реакций в РЛА с образцами, содержащими кровь, результаты следует интерпретировать с осторожностью и подтверждать другими методами (Bendall R. et al., 1991).

Таким образом, РЛА представляет собой наиболее простую диагностическую реакцию обнаружения ротавирусов. Являясь ценным методом экспресс-диагностики и обладая высокими показателями чувствительности и специфичности, этот метод, однако, не имеет никаких преимуществ перед ИФА, ПЭМ, ЭФ в ПААГ, кроме скорости проведения реакции, и нуждается в подтверждении другими методами.

Резюмируя материалы, следует отметить, что в целом осадочные тесты находят широкое применение в лабораторной диагностике ротавирусной инфекции в связи с высокой чувствительностью и скоростью получения результатов, простотой постановки и учета, а также отсутствием необходимости использования сложного оборудования и дорогостоящих реагентов.

Диагностические методы, основанные на выявлении вирус-специфических РНК. Разработка молекулярно-биологических методов в вирусологии привела к внедрению в пpaктику ряда новых диагностических тестов, основанных на выявлении вирусных РНК.

Их использование открыло возможность подхода к молекулярной эпидемиологии и позволило решить некоторые вопросы таксономии ротавирусов. Одним из первых диагностических методов этой группы стал электрофорез вирусного генома в геле.

Электрофорез вирусных РНК в полиакриламидном геле (ЭФ в ПААГ) достаточно универсален и широко распространен как в научно-исследовательских, так и пpaктических лабораториях. Благодаря своей высокой специфичности и чувствительности он позволяет решать целый комплекс проблем, связанных с ротавирусной инфекцией, и находит применение в диагностике, эпидемиологии и профилактике.

Возможность применения этого метода обусловлена уникальным хаpaктером распределения в геле одиннадцати сегментов вирусного генома и большой устойчивостью ротавирусной РНК к действию факторов окружающей среды. Существует несколько модификаций проведения ЭФ в ПААГ.

Незначительно отличаясь друг от друга, все они основаны на экстpaкции РНК ротавирусов, разгонке выделенных РНК в полиакриламидном геле под воздействием электрического поля и визуализации результатов разгонки РНК вирусного генома. Изменения могут быть на каждом из этих этапов проведения ЭФ в ПААГ. Так, выделение РНК ротавируса может проводиться непосредственно из фекалий, минуя стадию получения очищенного вируса возможно предварительное разделение одно- и двунитчатых РНК, введение метки 32Р, обработка исследуемого материала нуклеазой S1, разрушающей однонитчатые РНК структуры варьирует состав буферных растворов, процентное содержание разделяющего и концентрирующего геля сила тока при электрофорезе, методы окраски.

Время проведения исследования составляет 24-36 часов. В результате на полосах геля после его окраски нитратом серебра или этидиум-броми-дом выявляются профили вирусной РНК, соответствующие 11 сегментам генома вируса (Unicomb L. Е. et al., 1993 Assouli S. M. et al., 1995 Bos P. et al., 1995 Васильев Б. Я. и др., 1995 Szczepaniak Z. et al., 1996 Holmes J. H., 1996 Steele A. D. et al., 1996 Markowska-Daniel J. et al., 1996 Espinoza F. et al., 1997 Adah M. et al., 1997 Wu H. et al., 1998).

При соблюдении стандартности условий проведения электрофореза расположение сегментов генома достаточно стабильно и позволяет идентифицировать изолят на основе индивидуальности его фореграммы. Следует отметить, что хаpaктер распределения сегментов генома на фореграмме является генетически устойчивым признаком, и любые изменения в аминокислотной последовательности генома влекут за собой изменение скорости миграции вирусных белков (Kuzuya М. et al., 1996).

Более того, хаpaктер фореграммы, присущей определенному изоляту, может служить в качестве инструмента для расшифровки вспышек, выявления путей и источников заражения (Oishi J. et al., 1993 Broor S. et al., 1993 Beque R. et al., 1992). К тому же, именно этот метод позволил разделить ротавирусы на две подгруппы с так называемыми «короткими» или «длинными» фо-ретипами (обусловленными меньшей или большей подвижностью 10 и 11 сегментов генома), что имеет принципиальное значение для классификации RV популяции.

Следовательно, ЭФ в ПААГ может быть с успехом использован в диагностике, эпидемиологии, классификации и по отношению к целому ряду методик (РАЛ, ГА, выделение вируса на культуре клеток) — референс -методом.

Исследования, проведенные рядом авторских коллективов, показали, что ЭФ в ПААГ обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Сравнительное изучение этих параметров применительно ЭФ в ПААГ, ПЭМ и РЛА, проведенное при обследовании 103 детей, показало, что чувствительность составляла 90, 84 и 80%, а специфичность 100, 100 и 81% (Hendricks М. К. et al., 1995).

Аналогичные данные, с привлечением помимо указанных методов еще и ПЦР и ИФА получены Buesa J. и Husain М. Правда, чувствительность ЭФ в ПААГ, по данным этих авторов, несколько уступает результатам ПЦР и ИФА, однако специфичность составляет 100% (Husain М. et al., 1995 Buesa J. et al., 1996). Подобные результаты получены и нами при исследовании фекалий от 50 больных ОКЗ методами ПЭМ, ИФА и ЭФ в ПААГ. Показатели положительных находок в ЭФ в ПААГ составили 28% против 35% в ИФА и ПЭМ.

Однако следует отметить, что в трех пробах, где ротавирусы в ПЭМ обнаружены не были, по данным ЭФ в ПААГ зафиксирована фореграмма, хаpaктерная для ротавируса (Васильев Б. Я. и др. 1990). Более поздние наши исследования, проведенные на материале 510 больных ОКЗ с использованием ИФА, ПЭМ и ЭФ в ПААГ, позволили нам подтвердить ротави-русную этиологию заболевания в 37 и 23% соответственно (Васильев Б. Я. и др.

1995).

Maldonado A. et al. (1998) при сравнительном исследовании копроматериалов детей, госпитализированных с диареей, методами ЭФ в ПААГ и ИФА документировал RV природу заболеваний в 42,7 и 49,5% соответственно.

Необходимо отметить, что помимо горизонтального применяется и вертикальный электрофорез, который, по мнению ряда авторов, сопоставим с горизонтальным по специфичности и чувствительности, но более прост. При его проведении для визуализации результата авторы предлагают включать бромистый эти-дий непосредственно в гель и использовать один и тот же гель для нескольких исследований.

Ими также было сконструировано устройство с ультрафиолетовой подсветкой, позволяющее легко и удобно читать фореграммы (Zbinden R. et al., 1992).

Модификацию вертикального электрофореза с визуализацией фореграмм методом серебрения предложили Giardano М. О. et al. (1997). Полученные ими данные показали, что новая модификация чувствительнее, специфичнее и дешевле, чем общепринятый ЭФ в ПААГ.

Таким образом, метод ЭФ в ПААГ в настоящее время нашел широкое применение в лабораториях разных стран для диагностики RV. Многочисленные сравнительные испытания этого метода с ПЭМ, ИЭМ, РАЛ и ИФА свидетельствуют о его высокой специфичности и чувствительности, а также возможности применения ЭФ в ПААГ в качестве референс-метода при изучении новых тест-систем.

Использование электрофореза в полиакриламидном геле с целью выявления источников инфекции и путей ее распространения, а также расшифровки этиологии эпидемических вспышек явилось основой для успешного решения актуальных вопросов молекулярной эпидемиологии.

Процесс переноса белков (Western-blot) или нуклеиновых кислот (Dot-blot или Northern-blot и Southern-blot) из электрофоретической матрицы и их иммобилизация на поверхности твердой фазы называется блотингом, а полученный отпечаток — блотом. При анализе блотограмм с помощью иммунных сывороток метод называют иммуноблотингом.

В качестве зондов обычно используют либо РНК, трaнcкрибированные in vitro на матрице вирусного генома, либо клоны комплементарной ДНК, полученной на матрице вирусного генома с использованием обратной трaнcкриптазы и последующим молекулярным клонированием. Ранее метку зондов осуществляли изотопами 125J или 32Р, но в последние годы применяют нерадиоактивные метки — биотин или ферменты (щелочная фосфатаза, пероксидаза и др.), что существенно упрощает метод, поскольку снимает вопросы изотопной безопасности.

В этом случае результаты реакции фиксируются в виде цветовых пятен, образующихся под воздействием фермента на добавляемый субстрат, что свидетельствует о гибридизации зонда с РНК вируса в исследуемом материале.

2019-09-17admin


Игры в развитии дошкольников

Игры в развитии дошкольников Содержание статьи:«Dobble» — рефлекс и проницательностьВ игре Dobble рассчитывается, прежде всего, на восприятие, рефлексы и быстроту действий...

14 07 2024 10:49:32

Хаpaктеристика имени Андрей, сочетание с отчеством

Хаpaктеристика имени Андрей, сочетание с отчеством Непоседа, любит подвижные игры, не слишком слушает старших...

13 07 2024 13:11:59

Яблоки в сиропе на зиму

Яблоки в сиропе на зиму Содержание статьи:Яблоки в сиропе на зиму без стерилизацииЕсли длительное хранение десерта не планируется, стоит приготовить яблоки в сиропе на зиму без стерилизации...

12 07 2024 8:21:46

Польза и вред граната для организма

Польза и вред граната для организма Содержание статьи:О составе, пользе и вреде гранатаГранат может похвастаться содержанием большего количества аминокислот: их насчитывается во фрукте около пятнадцати...

11 07 2024 17:49:28

Шикарные волосы дома

Шикарные волосы дома Существует несчетное количество масок и косметических средств, которые помогут, не выходя из дома добиться результата не хуже, чем в дорогой парикмахерской...

10 07 2024 16:27:29

Как проявляется внематочная беременность

Как проявляется внематочная беременность Чем грозит внематочная беременностьПо сути своей, внематочная беременность возникает в ситуации, когда оплодотворенная яйцеклетка, продвигаясь по маточным трубам к матке, не достигает места своего назначения и прикрепляется, например, к стенкам маточной трубы...

09 07 2024 17:57:18

Здоровье беременной: безопасное и эффективное слабительное при

Здоровье беременной: безопасное и эффективное слабительное при Но при выборе того или иного метода следует учитывать реакции маленького человечка, который растёт в организме мамы...

08 07 2024 23:20:56

Значение фамилии Казарин, Казаринов, Козаринов

Значение фамилии Казарин, Казаринов, Козаринов : Козарин Бурунков, московский дворянин, 1528 Казарин Голохвастов, начало XVI в...

07 07 2024 19:22:47

Диета Маргариты Королевой на 9 дней: меню, результаты, отзывы

Диета Маргариты Королевой на 9 дней: меню, результаты, отзывы Диета Королевой «9 дней» подразумевает:Дробное питание...

05 07 2024 19:19:11

Варенье из земляники: рецепт, как варить на зиму

Варенье из земляники: рецепт, как варить на зиму Содержание статьи:В землянике невероятное количество самых разных витаминов...

04 07 2024 15:29:29

Сценарий для летнего лагеря: олимпийский резерв

Сценарий для летнего лагеря: олимпийский резерв Спорт нам в жизни очень нужен,А точней, необходим,И встречаемся, и дружимМы зимой и летом с ним...

03 07 2024 3:15:43

Банан с медом от кашля для детей и взрослых, отзывы о лечении

Банан с медом от кашля для детей и взрослых, отзывы о лечении Народная молва свидетельствует о необычных свойствах смеси меда и банана при бронхите...

02 07 2024 10:13:59

Церукал: при беременности, детям, таблетки, уколы

Церукал: при беременности, детям, таблетки, уколы Это приводит к тому, что головной центр не дает комaнды сокращения гладкой мускулатуре, в результате предоставляется возможность избежать тошноты и рвоты, а также избавиться от икоты...

01 07 2024 12:42:12

15 октября - какой праздник сегодня, Рожденные 15 октября

15 октября - какой праздник сегодня, Рожденные 15 октября Известно, что Международный День белой трости был впервые отмечен в США, и датой для события стало 15 октября – день, когда было принято соответствующее решение поддержать инициативу Международной федерации слепых о введении новой даты в календаре...

30 06 2024 9:58:29

Краснуха у детей и взрослых: симптомы, прививки, лечение и профилактика

Краснуха у детей и взрослых: симптомы, прививки, лечение и профилактика Хаpaктеризуется лёгким течением, не даёт пpaктически никаких осложнений...

29 06 2024 20:52:41

Приснилась Исповедь к чему это, что означает во сне Исповедь

Приснилась Исповедь к чему это, что означает во сне Исповедь К чему снится Исповедь: толкование по 100 авторамВидеть Исповедь во сне, к чему? (по Магическому соннику)Приснилась исповедь в церкви – сон означает частые угрызения совести...

28 06 2024 16:33:36

Как ухаживать за замиокулькасом

Как ухаживать за замиокулькасом В наших домах цветок появился сравнительно недавно и уже завоевал сердца многих...

27 06 2024 3:34:55

Потливость стала для вас проклятием? NormaDry избавит вас от него!

Потливость стала для вас проклятием? NormaDry избавит вас от него! — Непропорциональный гипергидроз – если человека беспокоят мокрые пятна на одежде только с одной стороны...

26 06 2024 1:23:32

Инструкция на случай экстренных родов: как принять роды вне

Инструкция на случай экстренных родов: как принять роды вне Содержание статьи:Внимание, начинается!Как понять, что роды начались и вам, скорее всего, придётся действовать самостоятельно? Важный фактор – частота и регулярность схваток...

25 06 2024 17:41:51

Куда поехать в апреле отдыхать, где можно отдохнуть, куда полететь?

Куда поехать в апреле отдыхать, где можно отдохнуть, куда полететь? Итак, куда стоит лететь отдыхать в апреле?Содержание статьи:Экзотический отдыхКуда поехать в апреле, если хочется незабываемых приключений и ярких фотографий? Разгар весны – идеальное время для знакомства с восточным колоритом Иордании...

24 06 2024 13:28:39

Кашель после гриппа не проходит: чем и как лечить его

Кашель после гриппа не проходит: чем и как лечить его Стоит ли беспокоиться?Остаточный кашель считают вариантом нормы...

23 06 2024 2:18:51

Отдых в Башкортостане: дом отдыха «Берёзки&raquo

Отдых в Башкортостане: дом отдыха «Берёзки&raquo Курорт не утрачивает своей актуальности на протяжении всего года...

22 06 2024 18:11:29

Памятка покупателю: овощи, правила покупки и хранения

Памятка покупателю: овощи, правила покупки и хранения Диетологи советуют съедать в день не менее 400 г овощей...

21 06 2024 9:14:13

Царский путь с вербами в руках

Царский путь с вербами в руках А сегодня православные вспоминают Вход Господень в Иерусалим...

20 06 2024 9:45:54

Отказы ребёнка от еды: малыш отказывается от смеси, советы

Отказы ребёнка от еды: малыш отказывается от смеси, советы Как бы ни был велик coблaзн, но не стоит заставлять его есть...

19 06 2024 3:51:29

Здоровье детей: самые распространённые ЛОР-болезни, виды

Здоровье детей: самые распространённые ЛОР-болезни, виды Иначе болезнь может принять хроническую стадию, а это чревато серьёзными проблемами...

18 06 2024 11:54:28

Ребёнок ударился головой, что делать

Ребёнок ударился головой, что делать После ощутимого удара головой первоначально малыш почувствует острую боль...

17 06 2024 0:49:50

Как научиться целоваться первый раз

Как научиться целоваться первый раз Поцелуй – слишком иHTиMная сфера, чтобы в ней было место репетициям...

16 06 2024 3:48:18

Можно ли беременным чипсы

Можно ли беременным чипсы Лучше питайтесь чем то полезным и откройте банку огурцов или помидоров, а можете и приготовить свои чипсы, пожарив тонкие ломтики картофеля на сковороде...

15 06 2024 19:28:17

Как отучить ребенка спать с родителями, с мамой?

Как отучить ребенка спать с родителями, с мамой? Важно сделать этот переход незаметным для ребенка, чтобы не создать стрессовую для него ситуацию...

14 06 2024 20:54:13

Компот из кабачков со вкусом ананаса на зиму

Компот из кабачков со вкусом ананаса на зиму В таком случае, предлагаем вашему вниманию компот из кабачков со вкусом ананаса, который прекрасно освежает и радует необычным сочетанием вкусового букета...

13 06 2024 14:12:23

Депрессия у подростков проблематика и причины

Депрессия у подростков проблематика и причины Нами были рассмотрены аспекты лечения депрессии при помощи лекарственных препаратов, виды депрессивных состояний, а также соматизированную депрессию...

12 06 2024 0:40:48

Что нужно ребенку в детский сад?

Что нужно ребенку в детский сад? Когда мы собираем ребенка в детский сад, в первую очередь стоит обратить внимание нижнее белье...

11 06 2024 12:11:59

Мотивация в учёбе, как полюбить учиться, советы

Мотивация в учёбе, как полюбить учиться, советы Порой сил, чтобы заставить себя учиться, просто не остаётся...

10 06 2024 12:22:25

Эритромицин при ангине: показания и противопоказания, как принимать

Эритромицин при ангине: показания и противопоказания, как принимать При вирусном тонзиллите показаны противовирусные препараты, при грибковом возбудителе необходимы антимикотики, а справиться с патогенными бактериями помогут антибиотики...

09 06 2024 4:28:43

Как купить корректирующее бельё

Как купить корректирующее бельё Корректирующее бельё, вот, что нужно для придания телу плавных и красивых линий...

08 06 2024 8:11:44

Как происходит процесс образования язвы и в чем заключается диагностика

Как происходит процесс образования язвы и в чем заключается диагностика Язва желудка – это не одиночное заболевание, в патологический процесс могут быть вовлечены остальные органы и системы пищеварения, причём иногда с осложнениями, которые могут угрожать жизни больного...

07 06 2024 5:38:11

Работа для мам в декрете

Работа для мам в декрете В семье, как правило, один или два ребенка, и женщины не ограничиваются лишь ролью мамы...

06 06 2024 3:33:56

Как устроить ребёнка в детский садик

Как устроить ребёнка в детский садик Чтобы получить место необходимо заранее встать на очередь в детский сад...

05 06 2024 16:23:17

6 лет какая свадьба, годовщина свадьбы 6 лет как называется

6 лет какая свадьба, годовщина свадьбы 6 лет как называется Несмотря на то, что юбилей не вызывает приятные ассоциации, название годовщина получила не случайно...

04 06 2024 6:46:54

Беременность и здоровье: острые респираторные заболевания

Беременность и здоровье: острые респираторные заболевания Осложняется ситуация тем, что те препараты, которые используют обычно с целью облегчения симптомов простуды, во время ожидания малыша принимать крайне нежелательно...

03 06 2024 16:56:45

Отдых в Алтайском крае

Отдых в Алтайском крае Протяжённость Большого Ярового озера достигает 10 км, а максимальная ширина составляет 8 км...

02 06 2024 8:34:10

Сонник Верблюд, к чему снится Верблюд во сне видеть

Сонник Верблюд, к чему снится Верблюд во сне видеть К чему снится Верблюд: толкование по 100 авторамСонник XXI векаВерблюд во сне к чему снится сновидцуВерблюд – Видеть во сне верблюда – означает, что вас ждет счастливое путешествие или серьезное официальное дело, поручение сидеть на нем – означает, что вы возьмете на себя чужую работу видеть мертвого верблюда – к препятствиям в пути, убить его – к веселому времяпрепровождению...

01 06 2024 7:56:28

Отдых в Сочи летом в июне, июле, августе: погода, вода

А ведь отдых в Сочи летом может быть самым разнообразным, и каждый турист найдет там все, чтобы вдоволь насладиться отпуском и запастись самыми яркими впечатлениями на целый год...

31 05 2024 23:43:22

Как можно аппетитно украсить салат

Как можно аппетитно украсить салат Они, конечно, от этого лучше на вкус не станут, но зато будут смотреться празднично...

30 05 2024 14:40:45

Чтобы дети не потеряли маму

Чтобы дети не потеряли маму У нее четверо детей...

29 05 2024 7:41:23

Скорая помощь» перед праздниками или быстрые диеты

Скорая помощь» перед праздниками или быстрые диеты Быстрые диеты для похудения имеют множество вариаций, к примеру, вот некоторые из них:В течение 3 дней, ваш рацион будет составлять только отварная курица без кожи...

28 05 2024 18:58:46

Народные средства если болит ухо: лечение боли, первая помощь

Народные средства если болит ухо: лечение боли, первая помощь Ушная боль может быть ноющей, пульсирующей, стреляющей, может возникать ощущение давления или заложенности, сильный зуд...

27 05 2024 21:25:50

Бpaк - это постоянное творчество

Бpaк - это постоянное творчество А после — ответы на более конкретные и специфические вопросы читателей, почитателей ее книг...

26 05 2024 17:55:18

Еще:
Знания -1 :: Знания -2 :: Знания -3 :: Знания -4 :: Знания -5 :: Знания -6 :: Знания -7 :: Знания -8 :: Знания -9 :: Знания -10 :: Знания -11 :: Знания -12 :: Знания -13 :: Знания -14 ::